FASE ANALÍTICA

¡Hola Laboratoristas! 

Hoy os presentaremos la fase analítica de la parte microbiológica de este reto. 

Antes de nada, vamos a realizar una observación macroscópica de la muestra. Para el examen macroscópico de las heces tendremos que tener en cuenta el olor, el color, la consistencia, si hay sangre o no y si tiene moco o no.

En nuestra caso recibimos una muestra de heces con presencia de sangre, olor fuerte y diarreica.

Después de la observación, para empezar ya con la identificación de las bacterias, tendremos que homogeneizarla y para ello, comenzaremos cogiendo entre uno y dos gramos de muestra y echando 6 mililitros de solución salina estéril en un tubo de ensayo estéril. Después homogeneizaremos con ayuda del vórtex hasta conseguir una mezcla homogenea. Una vez homogeneizada la muestra, haremos 4 siembras en 4 medios diferentes, con ayuda de un hisopo, cambiando este cada vez que hagamos una siembra. Acabaremos la siembra con un asa de siembra estéril y por último, empaparemos un hisopo en la muestra y lo dejaremos en el Caldo de Tetrationato.

Os lo explicamos de forma más visual en el siguiente esquema:

Tras todo este proceso, meteremos todo a incubar durante 24 horas a 37ºC y al día siguiente, leeremos los resultados de cada placa en los siguientes medios:

• Medio Salmonella-Shigella: Utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella sp. a partir de heces, alimentos y otros materiales con sospecha de contaminación de esta bacteria.
• Agar Sangre: Utilizado para el aislamiento de numerosos microorganismos y permite la observación de hemólisis. 
• Hemólisis beta: halo claro y brillante.
• Hemólisis gamma: no presenta halo.
• Hemólisis alfa: halo verdoso.
• MacConkey: Utilizado para el aislamiento de bacilos Gram negativos aerobios y anaerobios facultativos. Crecen todas las familias de Enterobacteriaceae. 

Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras y los fermentadores de lactosa, las colonias virarían a color rosado-rojo.

• Hektoen Entérico Agar: Utilizado para aislamiento de Salmonella spp. y Shigella spp. a partir de heces y alimentos.

• Caldo de Tetrationato: Nos servirá de enriquecimiento y tras la incubación de este, observaremos sedimento en la parte de abajo del tubo.

 Salmonella-Shigella.

Salmonella-Shigella. Las colonias aparentes en nuestra placa son incoloras con el centro negro, por lo que son microorganismos que producen SH2. Por ello, leyendo la ficha técnica del medio podemos decir que puede tratarse de los siguientes microorganismos: Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium.

La Escherichia coli y el Enterococcus faecalis lo descartaríamos. 

Agar sangre.

Agar Sangre. Podemos observar, que no hemos obtenido halo por lo que se trata de una hemólisis gamma, eso significa que no se produce lisis de glóbulos rojos.

Las colonias aparentes, pueden indicar que se trata de: 

Salmonella, crecimiento satisfactorio, sin hemólisis 

Agar MacConkey.

 

MacConkey. Las colonias aparentes, las cuales son incoloras, pueden indicar Salmonella typhimurium, Shigella flexneri o Proteus mirabilis. Volveríamos a descartar E.coli (colonias rosadas-rojizas) y Enterococcus faecalis (no crecen)

Agar Hektoen.

Hektoen Entérico Agar. Como veis, las colonias son del color del medio con el centro negro, por lo que no fermentan lactosa y producen SH2. Con estas características, habría sospecha de Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium o Proteus mirabilis. 

Descartaríamos la Shigella (colonias verdes, elevadas y húmedas), E.coli, Klebsiella y Enterococcus faecalis.

                                                         

Caldo de tretationato y agar salmonella-shigella. 

Caldo de Tetrationato. Utilizaremos el vórtex para mezclarlo bien y después lo sembraremos en una nueva placa de Salmonella-Shigella.